除少數培育基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培育基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培育基滅菌不完全，直接關系到試驗成果。因而有必要認真對高壓滅菌器進行滅菌作用的驗證。  1．試驗資料 

(1) 嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus  stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05 CFU/片。 (2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學指示卡。 

(3) 溴甲酚紫胨水培育基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。 (4) 0-150℃留點溫度計。 2．辦法與成果 

將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中。化學指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各預備5-10份。別離放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中心5處。如滅菌器為二層，則需放10處。 

留點溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩**40℃以下。每次監測后留點溫度計的溫差應存1℃之間，則闡明滅菌器內的溫度散布是均勻的。 

滅菌后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培育基內56-60℃培育24-48小時，調查色彩改變。如培育基變為黃色，闡明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細菌仍可在培育基中成長，分化葡萄糖產酸變為黃色。如培育基色彩不改變仍為紫色，則闡明芽胞已滅活。同時要用未經滅菌的紙片放入培育基內作為陽性對照，不加紙片的空白培育基作為陰性對照。 

化學指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變為黑色。跟著色彩改變的深淺，并與對照色比較，可判別滅菌作用是否到達要求。化學指示卡應在枯燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌作用的觀測。 

高壓蒸氣滅菌有必要使蒸氣順利進入滅菌器內，與滅菌物品觸摸，并將原有的冷空氣排出方可到達滅菌的作用。要進行空載熱散布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超越總體積的2/3)。二種驗證各重復三次，共做六次。5個點六次試驗標明溫度均在121℃，化學指示卡變黑；程度與對照色共同；培育基均未改變色彩，闡明高壓蒸氣滅菌作用合格。 

高壓滅菌器歸于強檢儀器，但強檢僅僅對儀器物理參數的查核。所以做過強檢的滅菌器還有必要進行滅菌作用的驗證。一些單位常常疏忽了這個重要的問題。G內市售的手提滅菌器，往往儀器指針到達所需的溫度，但滅菌物品的實踐溫度卻未到達要求。導致滅菌物品不完全，影響試驗成果。培育基滅菌不完全，影響培育基的運用及成果判別。因而高壓蒸氣滅菌器無菌作用的驗證是一個有必要引起重視的問題。